shRNA(short hairpin RNA, shRNA)是一段短发卡RNA序列,一般长19~23bp,常被用于RNA干扰沉默靶基因的表达,利用载体可把shRNA导入细胞。我们的shRNA质粒有以下特点与优势:

  • 载体使用U6启动子控制shRNA的表达框架,确保shRNA表达。
  • 质粒载体中包含绿色荧光蛋白的表达框,可作为报告基因来检测 DNA 的导入情况,可用来确定转染的条件和监测转染的效率。
  • 使用Kanamycin进行原核筛选,稻瘟素(blasticidin)筛选标记作为哺乳动物的细胞筛选。
  • 适用于多种哺乳动物细胞系的瞬时或稳定转染。
  • 另外,我们的质粒还可被包装到病毒颗粒中,用于感染多种细胞系。

shRNA质粒列表

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如果您选择生命之美,我们免费为您提供配套的阴性对照空载体,并提供可以直接用于转染的质粒。

套装组成 数  量(个)
针对目的基因设计的shRNA载体 1
阴性对照shRNA空载体 1
注:套装内质粒提供量为 :质粒1管(5ug/tube)+甘油菌1管
规   格 价  格 交货周期
1套 咨询 现货

 1、细胞培养及转染

人宫颈癌Hela细胞按照Invitrogen 的转染试剂Lipo2000 说明书要求进行转染,48h后收集样品,提RNA,进行RT-QPCR。

2、实验结果与分析

  1. 细胞转染48h后使用荧光显微观察GFP荧光表达情况NC

    NC
    shRNA

    shRNA

    描述:根据绿色荧光蛋白GFP的表达,可以判断质粒DNA成功导入Hela细胞,转染效率较高。

  2. 转染48h后,RT-QPCR检测干扰效果
    48h

    图2 目的基因RT-QPCR 的结果

    描述:转染48h后与空载体NC相比较,目的基因mRNA的相对表达水平显著降低,沉默效率高达80%。

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