单细胞蛋白组学
蛋白质是细胞的核心功能单位，在各种细胞过程中发挥关键作用，单细胞蛋白组学AbSeq有助于：
1、发现更精细亚群，蛋白表达量稳定，对于尤其像T细胞的分群更有优势。
2 、更全面的细胞marker表达解析。mRNA和蛋白的表达并不总是一致的，如PD1 mRNA表达量通常很低，而Abseq可以高水平的检测到PD1蛋白表达。通过不同维度的表达分析，更全面、更利于阐明细胞marker表达机制。
从试剂处理、标记物选择，到确保所有必要步骤准确执行，在单次实验中检测样本中的数十种蛋白质标记物并非易事。
BD AbSeq Immune Discovery Panel （IDP）应运而生，用于单细胞研究的高维蛋白质发现工具。
IDP 是什么
IDP 由针对主要人类免疫标记的 30 种不同特异性抗体组合在单个试管中构成。其性能与用 BD AbSeq 试剂中相同 30 种特异性抗体新鲜配制的混合物所产生的数据相当。
抗原 | 免疫细胞活化和抑制的Marker
规格 | 5 Tests/盒
用量 | 100万个PBMC/Test
样本类型 | 人PBMC样本
IDP 优势
单管便利性
▪ 包含 30 种预滴定抗体，覆盖主要免疫标志物（如 CD3、CD4、CD8、CD19、CD45RA、HLA-DR 等），无需手动混合。
▪ 冻干形式，复溶后可直接使用，节省试剂处理时间。
性能可靠
▪ 与新鲜混合抗体的检测结果高度相关（R²>0.98），确保实验一致性。
▪ 所有 30 种抗体在 PBMC 样本中均能特异性识别目标细胞类型（如 T 细胞、B 细胞、单核细胞等）。
灵活性扩展
▪ 支持添加其他 BD AbSeq 抗体（如 CD38、CD45RO、CD8 的不同克隆），不影响原有抗体性能（R²>0.99）。
▪ 兼容多克隆抗体，例如 CD8 的 SK1 和 RPA-T8 克隆可同时使用。
多组学兼容性
▪ 无缝集成 BD Rhapsody RNA 分析和多重检测试剂盒（SMK），支持单细胞 RNA + 蛋白联合分析。
▪ 结合多组学数据可揭示更精细的细胞亚群（如激活状态、功能差异）。
高性价比
▪ 单管设计减少试剂浪费，配合多重检测技术可同时处理 12 个样本，降低测序成本。
项目流程
实操展示
01 多组学兼容性
针对来自多个供体的外周血单个核细胞（PBMC），测试了免疫发现 panel（IDP）中包含的 30 种不同特异性抗体的性能。结果表明，该检测组中的所有 30 种特异性抗体都能可靠地检测到各自对应的目标。
A. 利用 IDP 抗体和 WTA mRNA 表达谱对静息和激活的 PBMC 进行 UMAP 降维后的细胞注释。
B. 图A 中 UMAP 图上 IDP 中每种 AbSeq 克隆的热图，显示了 AbSeq 对单个细胞类型检测的特异性。
02 可灵活添加感兴趣的其他特异性抗体
IDP的设计使其能够兼容额外的AbSeq特异性抗体。选取了三种不同的特异性抗体来证明上述能力：CD38一种常见表达的抗原；CD45RO用于测试该特异性是否能与检测组中已包含的CD45RA相互补充；以及CD8的RPA-T8克隆用于测试同一特异性的不同克隆能否添加到该检测组中，因为IDP中已经包含了CD8的SK1克隆。研究结果表明，添加更多的BD AbSeq抗体并不会影响IDP本身或所添加抗体的性能 。
A. 如高相关性所示（添加或未添加额外抗体时，相关系数R²均超过0.99），插入额外抗体并未影响IDP的性能。
B. 在UMAP图中展示了对IDP中CD8[SK1]和CD45RA（上排）的特异性与插入的额外抗体CD8[RPA-T8]、CD45RO和CD38（下排）的特异性进行的评估情况。插入的CD38检测到了预期应为CD38阳性的细胞类型。插入的CD8（RPA-T8）克隆呈现出与IDP中克隆（SK1）极为相似的染色模式，这表明插入抗体具有高特异性，以及针对同一抗原的两个克隆之间具有兼容性。CD45RO（插入的额外抗体）与CD45RA（IDP所含）对比鲜明的表达模式进一步证实了向IDP中添加AbSeq特异性抗体对实验结果没有不良影响。
03 实现多组学及多重检测
为了展示多组学分析的优势，我们仅分析了WTA数据（mRNA分析），并与WTA + AbSeq数据（mRNA和蛋白质分析）进行了对比。通过多组学方法，更多的细胞类型得以展现，从而提供了更深入的生物学见解。
A.对经IDP染色的细胞构建全转录组扩增（WTA）文库和抗体测序（AbSeq）文库，并进行测序。仅使用WTA（mRNA）数据进行的UMAP坐标定位和无偏聚类（表型图分析，Phenograph）展示在左侧，而使用WTA + AbSeq（mRNA和蛋白质）数据进行的坐标定位及注释展示在右侧。
为测试BD单细胞多重检测试剂盒（SMK）与IDP的兼容性，我们同时使用SMK和IDP对细胞进行染色，并构建WTA、AbSeq和SMK文库用于测序。然后将IDP中标志物的表达情况与未使用SMK时所产生的数据进行了比较。这些数据表明，添加SMK不会对IDP产生影响。
B.IDP + WTA与IDP + WTA + SMK之间的高相关性（相关系数R² > 0.99）