双荧光素酶报告基因

萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase）之所以被称为报告基因，是因为在基因表达调控研究时，利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是：将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游，或把3’-UTR区或lncRNA结合序列克隆在Firefly luciferase基因的下游，以研究启动子的强弱和转录因子对启动子的作用或miRNA对目的基因或lncRNA的调控作用（见图2）。与此同时，引入包含Renilla luciferase基因的TK载体作为内参，以便消除细胞转染等因素带来的组间误差。

1）启动子区域结合研究
将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游，与转录因子表达质粒共转染到工具细胞内，检测细胞萤火虫和海肾荧光素酶表达，海肾荧光素酶表达作为内参，用于消除细胞转染等因素带来的组间误差；若转染5’启动子区域序列的组别荧光虫/海肾相对荧光值显著升高，5’启动子区域序列突变的组别无变化，则说明该5’启动子区域序列为转录因子的启动子区域，且通过突变位点主要结合。