技术简介

M6A修饰在人转录组RNA中广泛存在，目前研究表明:超过7000个mRNA和300个IncRNA都含有这种修饰; 这种修饰富集分布在mRNA的终止密码子附近和3’UTR区域，暗示m6A修饰具有重要的调控功能。 很多m6A修饰位点在人和小鼠中保守存在，且某些m6A修饰在不同发育时期，其修饰水平也在不断变化,同样暗示其重要的调控功能。

目前对m6A的全基因组研究方法为meRIP-seq，其原理为通过特异识别m6A修饰的抗体，对细胞内具有m6A修饰的RNA片段进行免疫共沉淀通过对沉淀下来的RNA片段进行高通量测序，进而结合生物信息学分析，即可在全基因组范围内对m6A修饰的状况进行系统研究。

技术优势

✔  针对不同研究领域提供个性化方案；  
✔  分析流程全备，数据解读详细，后期数据挖掘可提供个性化分析；
✔  结合峰分析策略多种：含Ablife和Piranha两种方法；
✔  研究思路丰富：m6A修饰图谱及修饰特征分析，不同实验分组间差异m6A修饰位点和基因鉴定； 与RNA-seq、CLIP-seq数据等联合分析，揭示m6A修饰的功能。

技术流程

图1：实验流程
图2：数据分析流程

实测数据

图1：结合峰(peak)宽度统计
图2：Ablife方法和Piranha方法结合峰重叠分析

案例解析

▶ 鸭甲型肝炎病毒感染通过m6A修饰与鸭肝中高mRNA维持相关(Frontlmmunol.IF=8.786分)

通过对强毒性和弱毒性的鸭甲肝病毒(DHAV)感染的雏鸭肝脏组织进行m6A-seq测序,首次分析了鸭子mRNA上的m6A修饰水平及分布特征，发现GAAGAAG是修饰基序最丰富的基序，整合分析m6A-seq和RNA-seq数据，发现m6A与DHAV感染雏鸭肝脏中mRNA表达水平总体呈正相关(Wu etal.2022)。