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瑞兴生物RXBio

多组学技术服务与深度数据挖掘 · 从研究设计到实验验证的全流程支持
Single-cell RNA Sequencing

单细胞转录组测序

在单个细胞分辨率下解析基因表达,识别细胞类型与稀有亚群、重建分化轨迹、刻画细胞间通讯——把组织里被"平均掉"的异质性还原出来。

  • BD Rhapsody™
  • 10x Genomics
  • DNBelab C4
  • 墨卓 MobiNova
  • 寻因 SeekOne
  • 标准分析 + 个性化挖掘
5大平台BD / 10x / 华大智造 / 墨卓 / 寻因
500–20k细胞单样本可捕获细胞数
BD联合实验室瑞兴生物 BD 单细胞测序联合实验室
MGI认证单细胞 RNA 文库制备认证服务商
01

技术简介

单细胞转录组测序(scRNA-seq)通过微流控或微孔板技术把单个细胞分隔到独立的反应单元中,用细胞条形码(Cell Barcode)标记每个细胞、用分子标签(UMI)标记每条转录本,再经文库构建与高通量测序,一次获得成千上万个细胞各自的基因表达谱。

相比传统 bulk RNA-seq 得到的"组织平均值",单细胞数据能回答:组织里有哪些细胞、各占多少、谁在疾病或处理中发生了变化、它们之间如何互相影响。

单细胞转录组测序技术原理图
单细胞转录组测序技术原理图
02

技术优势

5平台

多平台按需选择

BD、10x、华大智造、墨卓、寻因均可承接,按样本类型与预算匹配,而不是"只有一种做法"。

QC

样本解离经验

针对实体瘤、脑、肺、骨等难解离组织有成熟方案,上机前细胞活率与结团率严格把关。

1:1

技术顾问对接

先讨论科学问题再定分组与细胞数,避免"测完不知道怎么用"。

+验证

可衔接实验验证

分析发现可直接转入细胞功能、流式、免疫荧光等实验,闭环支撑论文。

单细胞悬液制备流程示意:组织解离、过滤、洗涤重悬与上机前质检(细胞活率、浓度、结团率)
单细胞悬液制备:组织解离 → 过滤去团块 → 洗涤重悬 → 上机前质检(活率 / 浓度 / 结团率)
03

平台选择

五大平台原理相近、侧重点不同。不确定选哪个?

Microwell

BD Rhapsody™

联合实验室
捕获细胞
100–20,000 / 样本
适合样本
脆弱细胞、低起始量
特色
靶向 / 全转录组 + 蛋白多组学

微孔板重力沉降捕获,对细胞剪切力小,适合中性粒细胞等脆弱细胞类型。

Droplet

10x Genomics

文献应用最广
捕获细胞
500–10,000 / 通道
适合样本
常规组织、PBMC
特色
3'/5' 表达 + 免疫组库

油包水微滴体系,通量高、数据格式通用,便于与公共数据集整合分析。

Droplet

DNBelab C4

MGI 认证服务商
捕获细胞
500–20,000 / 样本
适合样本
大队列、预算敏感项目
特色
国产平台、单细胞 ATAC 可配套

华大智造国产单细胞平台,性价比高,适合样本量较大的队列研究。

Droplet

墨卓 MobiNova

LightCut™ 光分离
捕获细胞
500–20,000 / 通道
适合样本
常规组织、PBMC、免疫组库
特色
5' 转录组 + V(D)J 全长、捕获率 ≥ 70%

液滴式微流控芯片,核酸捕获仅 6 min,一次可运行 4 个样本;双胞率 < 5%(10,000 细胞),性能对齐国际主流平台。

Droplet

寻因 SeekOne® DD

多组学扩展
捕获细胞
500–12,000 / 通道
适合样本
大队列、脆弱细胞样本
特色
3'/5' 转录组 + 免疫组库 + 表观多组学

数字液滴平台 5 min 完成捕获,多胞率 < 0.3%/1,000 细胞;一次最多可运行 128 个样本,适合大规模队列与多组学联合研究。

* 参数为常规项目参考范围,具体以项目方案为准。

04

实验流程

1

方案设计

明确分组、细胞数与平台

2

样本解离

组织消化制备单细胞悬液

3

细胞质检

活率、浓度、结团率检测

4

捕获建库

细胞捕获、反转录与文库构建

5

上机测序

高通量测序与数据质控

6

分析交付

标准分析、报告与解读会

05

样本要求

样本类型建议送样量保存与运输
新鲜实体组织推荐≥ 200 mg(穿刺样本建议 2 条以上;特殊组织见下方细则)PBS 或生理盐水洗去血液后,放入加满组织保存液(MACS Tissue Storage Solution,货号 130-100-008)的样本保存管中,完全浸没样本,封口膜密封,泡沫纸 / 棉花缠裹防震,禁止样本直接接触冰袋;泡沫盒内放 2~3 个 −20℃ 预冷生物冰袋 4 ℃ 运输(不可用 −80℃ 冰袋,会冻伤组织),顺丰 48 h 内可达优先,超 48 h 建议高铁快送
新鲜血液 / 骨髓人全血 4–6 mL、小鼠 ≥ 1 mL(其他物种 1–5 mL);骨髓血 4–6 mL、骨髓组织 ≥ 200 mg紫头 EDTA 抗凝管,冰袋(2–8 ℃)湿冰运输,24 h 内送达;默认提取 PBMC,48 h 内寄送仍可处理,骨髓组织运输同新鲜实体组织,冲出的骨髓细胞按悬液样本同血液寄送;24 h 后中性粒细胞偏高风险增加(关注粒细胞请提前沟通)
细胞系 / 单细胞悬液浓度 700–1,200 个/μL,总量 10 万以上;活性 > 90%、结团率 < 10%、有核率 > 70%、直径 5–40 μm低吸附无 RNA 酶管,冰袋湿冰运输(参考血液类);培养细胞用培养瓶装满培养基常温运输,夏季防高温、冬季防冻
体液悬液(胸腹水 / 脑脊液 / 灌洗液等)体积 > 100 μL(活细胞总量 4 万以上),质检标准同细胞悬液低吸附无 RNA 酶管湿冰运输,避免剧烈震荡;尿液常温运输;重悬使用不含 Ca²⁺ / Mg²⁺ 的 1×PBS 或 1640 培养基
冻存组织≥ 200 mg修剪出目的组织、无菌纸吸干表面水分,液氮速冻后 −80 ℃ 保存,干冰运输;建议使用冻存 1 个月内样本,需通过 total RNA 质检(RIN > 7)
冻存细胞活细胞 ≥ 1×10⁶(冻存复苏有损耗,活性越高越好)细胞冻存液梯度冻存、液氮保存,干冰运输,避免室温久置导致活性下降与 RNA 降解;送样后一个月内处理
特殊组织送样量细则(常规 ≥ 200 mg 之外)
需加量组织正常肠 / 胃 > 300 mg;皮肤 / 黑色素瘤 > 300 mg;胆管胆囊 > 300 mg;生殖类 / 胎盘蜕膜 > 300 mg;脂肪 > 300 mg;动脉 / 静脉 / 血栓 / 心脏瓣膜 > 400 mg;硬骨 / 软骨、肌腱韧带 > 500 mg;牙龈 / 牙根髓 > 50 mg;眼科人 > 50 mg(小鼠每次 2 只 4 个组织)
建议抽核的组织脑(关注神经元)、心 / 肝(功能细胞较大)、心肌与肌肉、成熟脂肪等建议抽核送样;小鼠心 / 肝取样建议灌注去除组织间血液

* 送样前请提前填写《单细胞项目送样登记表》并准确填写建库类型信息;取样与送样细节请对照《武汉瑞兴生物单细胞类相关产品送样取样建议》;送样前请与业务经理确认并索取《样本信息单》。

06

分析内容

标准分析 STANDARD

  1. 数据质控与过滤细胞 / 基因过滤、双细胞去除、批次校正
  2. 降维聚类PCA / UMAP / t-SNE
  3. 细胞类型注释Marker 基因 + 参考数据集
  4. 差异表达分析亚群间 / 组间差异基因
  5. 功能富集GO / KEGG / GSEA

高级分析 ADVANCED

  1. 拟时序分析Monocle / RNA velocity 分化轨迹
  2. 细胞通讯CellChat / CellPhoneDB 配体-受体互作
  3. 转录因子调控网络SCENIC regulon 分析
  4. CNV 推断肿瘤细胞恶性鉴定
  5. 多组学整合联合空间组 / bulk / 公共数据
07

应用案例

Nature
Communications
IF 18.1 2026 · 华中科技大学同济医学院 张德均团队

BD 单细胞测序解析肝实质细胞重编程:结直肠癌肝转移新机制

Hepatocytes functionally reprogrammed by KIAA1199-high colorectal cancer cells favour the accumulation of pro-metastatic Egr1+ neutrophils

  • 我司支持BD Rhapsody™ 单细胞转录组测序(预转移期肝脏组织)与多组学联合分析支持
  • 样本设计"双肿瘤小鼠模型":盲肠原位植入不同 KIAA1199 表达水平的结直肠癌细胞(Vector / OE / KD)建立原发灶,7 天后经脾脏注射模拟血行播散;预转移阶段(第 14 天)取肝脏组织行 BD Rhapsody 单细胞测序,并联合空间转录组、蛋白质组学与体内外功能实验验证
  • 研究背景结直肠癌肝转移是患者死亡的主要原因,发生转移后 5 年生存率仅 12%–30%;肿瘤如何在转移发生前"远程改造"肝脏微环境,机制尚不清楚
研究发现
  • KIAA1199 高表达驱动肝转移,诱导全新促转移中性粒细胞亚群 Neu-C2(Egr1⁺),定位于肿瘤–肝脏交界血管生成区,促进内皮细胞成管
  • 重编程肝细胞亚群 Hepa-C11 高表达 SAA2,经 SAA2–FPR2 轴诱导并维持 Egr1⁺ 中性粒细胞(FPR2 拮抗剂 WRW4 可减少转移负荷)
  • 上游机制:KIAA1199⁺ 肿瘤细胞分泌 GRN⁺ 胞外囊泡,被肝细胞摄取后抑制 PPARγ、上调 SAA2(PPARγ 激动剂罗格列酮可逆转)
  • 血清 KIAA1199 + SAA2 联合模型可预测肝转移风险(94 例训练集 + 70 例外部验证)

阅读原文 doi: 10.1038/s41467-026-69250-1 →

Journal of
Hematology & Oncology
IF 47.8 2022 · 华中科技大学同济医学院附属同济医院 吴孔明 / 褚倩团队

单细胞转录组助力新一代口服 STING 激动剂 MSA-2 联合 TGF-β/PD-L1 双特异抗体抗癌

Combination of oral STING agonist MSA-2 and anti-TGF-β/PD-L1 bispecific antibody YM101: a novel immune cocktail therapy for non-inflamed tumors

  • 我司支持单细胞样品制备优化与 scRNA-seq、scTCR-seq 实验,获得高质量单细胞转录组与免疫组库数据
  • 样本设计EMT-6 乳腺癌小鼠肿瘤模型 4 个分组(对照 / MSA-2 单药 / YM101 单药 / 联合用药),scRNA-seq 共获得 71,372 个细胞,鉴定 9 类免疫细胞簇,并细分出 9 个 T 细胞亚群
  • 研究背景免疫荒漠型肿瘤缺乏 T 细胞浸润,对 PD-1/PD-L1 治疗耐药;TGF-β/PD-L1 双特异性抗体 YM101 在免疫荒漠型模型中作用有限,口服 STING 激动剂 MSA-2 与其联用的效果有待系统评估
研究发现
  • MSA-2 促进 DC 细胞成熟与抗原递呈,与 YM101 协同增强 T 细胞活化与 IL-12 产生
  • 联合用药显著提升肿瘤浸润 CD8⁺ T、NK 细胞与 M1 型巨噬细胞数量,Treg 数量显著下降
  • 单细胞图谱显示联合治疗优先增强 LY6C2⁺ M1 型巨噬细胞亚群活性
  • 联合疗法在免疫排斥型与免疫荒漠型模型中均显著抑瘤并延长荷瘤小鼠生存,克服免疫治疗耐药

阅读原文 doi: 10.1186/s13045-022-01363-8 →

查看更多单细胞案例 →

08

常见问题

每个样本需要测多少个细胞?
取决于研究目标。常规组织细胞图谱一般 5,000–10,000 个细胞/样本即可;若关注占比 <1% 的稀有亚群,建议提高细胞数或先富集目标细胞。
样本没法及时送到,可以冻存吗?
可以。细胞悬液可程序降温冻存;部分组织可使用组织保存液短期保存,或考虑单细胞核测序(snRNA-seq)方案。请提前与技术顾问沟通。
风险告知:冻存样本存在 RNA 降解和细胞活性下降的风险,尤其是冻存超过 1 个月的样本,可能面临建库失败或数据质量降低的风险。
禁止直接冷冻:严禁将新鲜组织或细胞直接放入-80℃冰箱而不经过液氮速冻或程序降温,这会导致冰晶形成破坏细胞结构。
单细胞和单细胞核测序怎么选?
新鲜样本、关注胞质转录本时优先单细胞;冻存组织、脑/心肌/脂肪等难解离组织更适合单细胞核测序。
项目周期一般多长?
样本合格后,建库测序约 2–3 周,标准分析约 1–2 周;高级分析按需求另行约定。
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