单细胞免疫组库测序 TCR/BCR｜瑞兴生物 RUIXING BIOTECH

单细胞免疫组库

在同一个细胞里读出 TCR α/β 或 BCR 重链/轻链的可变区序列，同时保留它的转录组。免疫组库测序能说清"克隆有多多样"，单细胞免疫组库还能多说三件事：扩增的是哪一群细胞、这个克隆在几个亚群之间流动、治疗前后换没换人。

10x / BD 双平台

TCR α / β 配对

BCR 重 / 轻链配对

CDR3 克隆分型

转录组同细胞

维度	10x Genomics Chromium 5′	BD Rhapsody
捕获方式	油包水液滴，细胞与凝胶珠一对一包裹	微孔阵列沉降，细胞与 barcode 磁珠落入同一微孔
建库方向	5′ 端捕获，V(D)J 由恒定区巢式引物富集	3′ 端表达，VDJ 全长（FL）经随机引物延伸获得，与靶向扩增（TTA）并行
细胞通量	单样本 500–20,000 细胞；单芯片最高 160,000 细胞、可上 8 个样本	搭配 HT 系统，单次混样可达 80,000 细胞
多样本混合	CellPlex / hashtag 标记后混测	12 个 Sample Tag，稀有细胞样本混样更省成本
蛋白检测	TotalSeq 抗体-寡核苷酸	AbSeq 抗体-寡核苷酸
各自的长处	生态成熟、公开数据最多，结果便于与 GEO 上的同类数据比对	一个试剂盒同时扩增 αβ 与 γδ TCR 的 V(D)J；磁珠可长期保存，便于后续补测

维度

10x Genomics Chromium 5′

BD Rhapsody

捕获方式

油包水液滴，细胞与凝胶珠一对一包裹

微孔阵列沉降，细胞与 barcode 磁珠落入同一微孔

建库方向

5′ 端捕获，V(D)J 由恒定区巢式引物富集

3′ 端表达，VDJ 全长（FL）经随机引物延伸获得，与靶向扩增（TTA）并行

细胞通量

单样本 500–20,000 细胞；单芯片最高 160,000 细胞、可上 8 个样本

搭配 HT 系统，单次混样可达 80,000 细胞

多样本混合

CellPlex / hashtag 标记后混测

12 个 Sample Tag，稀有细胞样本混样更省成本

蛋白检测

TotalSeq 抗体-寡核苷酸

AbSeq 抗体-寡核苷酸

各自的长处

生态成熟、公开数据最多，结果便于与 GEO 上的同类数据比对

一个试剂盒同时扩增 αβ 与 γδ TCR 的 V(D)J；磁珠可长期保存，便于后续补测

样本类型	建议送样量	保存与运输
外周血 / PBMC最常用	人全血 4–6 mL，小鼠 ≥ 1 mL，紫头 EDTA 抗凝管（TCR/BCR 建库现支持人与小鼠）	冰袋（2–8 ℃）湿冰运输，24 h 内送达；默认提取 PBMC，48 h 内寄送仍可处理，骨髓组织运输同新鲜实体组织，冲出的骨髓细胞按悬液样本同血液寄送；24 h 后中性粒细胞偏高风险增加（关注粒细胞请提前沟通）；也可先分离 PBMC 冻存后干冰运输
新鲜组织推荐	≥ 200 mg（穿刺样本建议 2 条以上；特殊组织见下方细则）；肿瘤 / 炎症组织避开坏死、钙化、硬化、纤维化部位	PBS 或生理盐水洗去血液后，放入加满组织保存液（MACS Tissue Storage Solution，货号 130-100-008）的样本保存管中，完全浸没样本，封口膜密封，泡沫纸 / 棉花缠裹防震，禁止样本直接接触冰袋；泡沫盒内放 2~3 个 −20℃ 预冷生物冰袋 4 ℃ 运输，顺丰 48 h 内可达优先，超 48 h 建议高铁快送
单细胞悬液	浓度 700–1,200 个/μL，总量 10 万以上；活性 > 90%、结团率 < 10%、有核率 > 70%、直径 5–40 μm	低吸附无 RNA 酶管，冰袋湿冰运输（参考血液类）
冻存组织 / 冻存细胞	冻存组织 ≥ 200 mg；冻存细胞活细胞 ≥ 1×10⁶	冻存组织液氮速冻后 −80 ℃ 保存，干冰运输，建议使用冻存 1 个月内样本，需通过 total RNA 质检（RIN > 7）；冻存细胞干冰运输，送样后一个月内处理
特殊组织送样量细则（常规 ≥ 200 mg 之外）
需加量组织	正常肠 / 胃 > 300 mg；皮肤 / 黑色素瘤 > 300 mg；胆管胆囊 > 300 mg；生殖类 / 胎盘蜕膜 > 300 mg；脂肪 > 300 mg；动脉 / 静脉 / 血栓 / 心脏瓣膜 > 400 mg；硬骨 / 软骨、肌腱韧带 > 500 mg；牙龈 / 牙根髓 > 50 mg；眼科人 > 50 mg（小鼠每次 2 只 4 个组织）

样本类型

建议送样量

保存与运输

外周血 / PBMC最常用

人全血 4–6 mL，小鼠 ≥ 1 mL，紫头 EDTA 抗凝管（TCR/BCR 建库现支持人与小鼠）

冰袋（2–8 ℃）湿冰运输，24 h 内送达；默认提取 PBMC，48 h 内寄送仍可处理，骨髓组织运输同新鲜实体组织，冲出的骨髓细胞按悬液样本同血液寄送；24 h 后中性粒细胞偏高风险增加（关注粒细胞请提前沟通）；也可先分离 PBMC 冻存后干冰运输

新鲜组织推荐

≥ 200 mg（穿刺样本建议 2 条以上；特殊组织见下方细则）；肿瘤 / 炎症组织避开坏死、钙化、硬化、纤维化部位

PBS 或生理盐水洗去血液后，放入加满组织保存液（MACS Tissue Storage Solution，货号 130-100-008）的样本保存管中，完全浸没样本，封口膜密封，泡沫纸 / 棉花缠裹防震，禁止样本直接接触冰袋；泡沫盒内放 2~3 个 −20℃ 预冷生物冰袋 4 ℃ 运输，顺丰 48 h 内可达优先，超 48 h 建议高铁快送

单细胞悬液

浓度 700–1,200 个/μL，总量 10 万以上；活性 > 90%、结团率 < 10%、有核率 > 70%、直径 5–40 μm

低吸附无 RNA 酶管，冰袋湿冰运输（参考血液类）

冻存组织 / 冻存细胞

冻存组织 ≥ 200 mg；冻存细胞活细胞 ≥ 1×10⁶

冻存组织液氮速冻后 −80 ℃ 保存，干冰运输，建议使用冻存 1 个月内样本，需通过 total RNA 质检（RIN > 7）；冻存细胞干冰运输，送样后一个月内处理

特殊组织送样量细则（常规 ≥ 200 mg 之外）

需加量组织

正常肠 / 胃 > 300 mg；皮肤 / 黑色素瘤 > 300 mg；胆管胆囊 > 300 mg；生殖类 / 胎盘蜕膜 > 300 mg；脂肪 > 300 mg；动脉 / 静脉 / 血栓 / 心脏瓣膜 > 400 mg；硬骨 / 软骨、肌腱韧带 > 500 mg；牙龈 / 牙根髓 > 50 mg；眼科人 > 50 mg（小鼠每次 2 只 4 个组织）

The Journal of
Headache and Pain

IF 8.7 文献案例 · 2026 · 嘉兴大学附属医院沈凯宇、刘贤丽、付杰团队

三叉神经痛单细胞免疫图谱：鉴定与卡马西平耐药相关的跨谱系程序

A single-cell immune cell atlas of trigeminal neuralgia identifies cross-lineage programs linked to carbamazepine resistance

样本设计11 例外周血 PBMC，分四组：健康对照 3 例、未治疗 2 例、卡马西平有效 3 例、卡马西平无效 3 例；10x Genomics 平台做 scRNA-seq + 配对 scTCR/scBCR 测序，质控后 122,582 个高质量细胞；另用三叉神经根硬膜内压迫（idTNC）小鼠模型做流式验证
研究背景三叉神经痛的一线药物是卡马西平（CBZ），但约 30% 患者最终疗效不足或不耐受；微血管减压术后也有 20%–30% 无法获得持久缓解。说明除了血管压迫，还有别的机制在维持疼痛。外周免疫在"未治疗—有效—耐药"整条病程上是什么样，此前没有系统描绘

研究发现

CD8⁺ T 细胞被拆成 5 个亚群（CCR7、SLC4A10、KLRC1、GZMB、TNF）。GZMB 与 TNF 两个亚群克隆扩增最明显；TNF 亚群几乎只在用过卡马西平的两组里出现，在耐药组占比很高，健康人和未治疗组几乎没有——这是单纯按细胞比例看不出来的
克隆共享格局随治疗状态整体重排：健康与未治疗组是 CCR7 → GZMB（各 8 个共享克隆型），有效组转为 SLC4A10 → GZMB（12 个），耐药组则出现 GZMB 与 TNF 之间多达 52 个共享克隆型——提示耐药状态下出现了一条以促炎程序收尾的分化路径
BCR 一侧没有大克隆扩增，但耐药组 B_ZBTB16 与 B_CD80 共享 12 个克隆型（有效组是双向均衡的过渡关系），说明耐药时 B 细胞两个亚群被"焊"在了一起，形成克隆耦合
跨谱系看：Treg 选择性减少并伴随 YBX1 升高，单核细胞向 CTNNB1 相关促纤维化 / 促血管表型极化，细胞通讯落在"炎症—基质重塑—血管生成"这条轴上。耐药不是某群细胞多了少了，而是多条谱系一起换了程序

阅读原文　doi: 10.1186/s10194-026-02502-z →

单细胞免疫组库

技术简介

技术优势

配对链不丢

克隆型与细胞状态钉在同一个细胞上

克隆扩增可量化、可分组比较

跨亚群、跨样本的克隆共享

不需要预先知道抗原

能继续往上叠

平台与建库路线

研究领域

肿瘤免疫与免疫治疗

感染与疫苗

自身免疫与慢性炎症

移植与细胞治疗

血液肿瘤

神经免疫与慢病

实验流程

方案设计

样本制备

细胞质检

单细胞捕获与逆转录

V(D)J 富集与文库构建

测序与组库分析

样本要求

分析内容

标准分析 STANDARD

高级分析 ADVANCED

应用案例

三叉神经痛单细胞免疫图谱：鉴定与卡马西平耐药相关的跨谱系程序

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