免疫类实验

这四项通常接在细胞模型构建与细胞功能实验之后：模型建好、表型出来，再用 IHC／IF 定位置、ELISA 定量、WB 确证，把"为什么会这样"补上。转录本层面的定量与定位，看分子实验检测里的 qPCR 与 FISH。

免疫组化（IHC）的做法是：先用一抗认住切片里的目标抗原，再用带辣根过氧化物酶（HRP）的二抗把信号放大，加 DAB 底物后阳性部位沉淀出棕黄色，最后用苏木素把细胞核染蓝。于是整张片子形成"蓝底 + 棕黄信号"的对比，阳性在核里、胞质里还是膜上一眼能看出来——这是把样本磨碎做 WB 拿不到的信息。

理论上只要能产生抗体结合的东西都能测：蛋白、核酸、多糖、病原体。实际能不能做出来，取决于三件事——抗原有没有被修复出来、抗体特不特异、内源性酶有没有被压住。这三件事都做对了，判读才有意义。

免疫荧光（IF）把二抗上的酶换成了荧光基团：一抗认靶标，带不同颜色的二抗把不同靶标分开，DAPI 把细胞核染蓝做位置参照。因为荧光基团的激发／发射波长不同，同一张切片上可以同时看 2–3 个靶标——这正是"共定位"能成立的基础：两个颜色在同一处叠出黄色，才谈得上"这两个蛋白在同一个位置"。

石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片都能做。石蜡切片形态好、能长期存档，但要过脱蜡和抗原修复；冰冻切片抗原保存好、适合膜蛋白和磷酸化抗体；细胞爬片最干净，适合看亚细胞分布和细胞骨架。流程条按石蜡切片写，其余两种跳过脱蜡、修复参数另调。

ELISA 的名字来自"酶联免疫吸附"：把抗体固定在酶标板孔底，样品里的抗原被抓住，再用酶标记的抗体认住抗原的另一端，加底物后酶把无色底物催化成有色产物。颜色深浅与抗原量成正比，酶标仪读吸光度，再用同期做的标准曲线换算成浓度——所以它给的是绝对值，这一点和 WB 的相对灰度完全不同。

我们用得最多的是双抗体夹心法，流程条里的"孵育 HRP 标记链霉亲和素"说明中间还接了一层生物素化二抗——生物素与链霉亲和素的结合把信号再放大一轮，灵敏度能到 pg/mL 级。测小分子（激素、药物）则要用竞争法，原理相反：样品里的抗原越多，占掉的抗体越多，显色越浅。

WB 的思路是把"混合物"变成"按分子量排好队的条带"：蛋白先被 SDS 变性并裹上负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶里按分子量大小跑开，转到膜上，再用抗体认靶标，最后靠 ECL 发光显影。条带出现在哪个位置说明分子量对不对——有没有非特异条带、有没有前体／成熟体、有没有降解片段；条带深浅说明表达量，但要比得准，必须对内参归一化。

对新基因的表达产物，或者手上没有针对天然蛋白的抗体，也可以给目标蛋白挂一个标签（Flag、HA、GFP、His），用抗标签抗体来检测——这是原页特意提到的一条路，做质粒过表达时很常用。