研究背景

调节性 T 细胞（Treg）负责维持免疫耐受，但在肿瘤微环境中又会压制抗肿瘤免疫，是免疫治疗中最难拿捏的一群细胞。FOXP3 是 Treg 的主转录因子，人类 FOXP3 基因的外显子 2 可以被跳过，产生全长型（FOXP3FL）与缺失型（FOXP3Δ2）两种亚型，外显子 2 的取舍直接影响 Treg 的抑制能力。但究竟是哪个因子在管这件事，此前并不清楚。

研究方法

研究分四层推进。体外机制层面，构建人/鼠 Foxp3 minigene 系列突变体定位外显子 2 的剪接调控区，筛选 7 种剪接因子，用 RNA pull-down 与 RNA 免疫沉淀验证直接结合，并用不含内含子的 FOXP3 ORF 质粒把“剪接”与“翻译”两层拆开。体内功能层面，构建人源化小鼠（Foxp3-Hu）接种 MC38 结肠癌模型，并以单细胞转录组解析肿瘤内 Treg；同时构建 Treg 特异性 Srsf3 敲除小鼠（Srsf3-cKO）评估免疫耐受。深度解析层面，采用单细胞三代全长测序，按 SRSF3 表达量取前 25% 与后 25% 的 Treg 比较基因表达与可变剪接差异。瑞兴生物承担 DNBelab C 单细胞转录组与单细胞三代全长转录组测序。

主要发现

1. 外显子 2 跳跃降低 Treg 功能，反而抑制肿瘤

人源化小鼠出现 FOXP3 外显子 2 跳跃、Treg 中 FOXP3 蛋白下降，但 Treg 数量与 CD4/CD8 比例无明显变化。接种 MC38 后，小鼠肿瘤生长显著减缓、生存期延长，肿瘤内 CD8+ T 细胞浸润增加。单细胞转录组显示肿瘤 Treg 中 Foxp3、Tnfrsf1b（TNFR2）、Gzmb 显著下调。TCGA 分析则显示，FOXP3 外显子 2 高保留与结肠癌、头颈癌、乳腺癌等不良预后显著相关。

2. SRSF3 通过结合外显子内 ESE 元件促进外显子保留

突变筛选发现外显子 2 内的 hmt10 区段是一个外显子剪接增强子（ESE），缺失后外显子 2 保留率显著下降。7 种剪接因子中，SRSF3 过表达显著促进外显子 2 保留，hnRNP L 与 9g8 则起抑制作用；SRSF3 敲低或使用抑制剂 SF1003 均可促进外显子跳跃。RNA pull-down 与 RNA 免疫沉淀证实 SRSF3 直接结合该 ESE 序列。在人 Treg 中，SRSF3 敲低降低外显子 2 保留与全长 FOXP3 蛋白，过表达则相反。

3. SRSF3 还管翻译：mRNA 不变，蛋白变多

用不含内含子的 FOXP3 全长或 Δ2 ORF 质粒（3×Flag 标签）在 293 细胞中验证，SRSF3 过表达显著增强全长 FOXP3 蛋白表达，而 mRNA 水平无显著变化，说明调控发生在翻译水平。小鼠 Foxp3 本身没有可变剪接，同样受 SRSF3 调控，证明这条翻译调控不依赖剪接。

4. 单细胞三代测序画出 SRSF3 的调控网络

按 SRSF3 表达量把 Treg 分高、低两组比较，鉴定出 660 个显著差异表达基因，高表达组中核糖体蛋白基因（Rps、Rpl 系列）及 Ebf1、Ptma 等免疫相关基因显著上调；同时检测到 145 个显著变化的剪接事件，涵盖外显子跳跃、可变 5′/3′ 剪接位点与内含子保留，涉及 Tcirg1、Septin7、Cacna1e 等 Treg 功能相关基因。另一方面，Treg 特异性 Srsf3 敲除小鼠 3–5 周内全部死亡，出现多器官炎症浸润、Treg 数量减少、抗 dsDNA 自身抗体升高，说明 SRSF3 是 Treg 体内稳定的必需因子。

瑞兴技术支持

瑞兴生物为本研究提供 DNBelab C 单细胞转录组测序与 Oxford Nanopore 单细胞三代全长转录组测序支持。单细胞三代测序的价值在于：在单个细胞分辨率上直接读通完整转录本，既拿到基因表达定量，又拿到全基因组可变剪接图谱（SE/A3/A5/RI/MX 等），从而把 SRSF3 在 Treg 中“调控哪些基因、改变哪些剪接”的整张网络画出来，而不只是停在 FOXP3 一个靶点上。

详情解读

论文信息：SRSF3 determines T_reg cell fate in antitumor immunity and autoimmunity. Science Advances, 2026. DOI：10.1126/sciadv.aeh1671

瑞兴生物公众号原文解读：项目文章 | 瑞兴单细胞三代助力 Science Advances：揭示 SRSF3 决定 Treg 在抗肿瘤免疫与自身免疫中的双重角色